检验科医用显微镜制样时有那些细节需要注意的

检验科作为临床诊断的核心环节，医用显微镜的制样质量直接影响病理分析、细胞学检测及微生物鉴定的准确性。从样本采集到Z终封片，每一步操作都需严守规范，避免“假阳性”或结构失真。

一、样本采集与预处理：确保代表性

检验科样本类型多样（如血液、尿液、痰液、脱落细胞），采集需严格遵循无菌操作原则，避免污染或降解。例如：

血液涂片：需采集新鲜抗凝血（如EDTA管），推片时控制角度（30°-45°）与速度，确保血膜均匀、尾端渐薄，避免红细胞重叠或白细胞堆积。

尿液离心：需根据尿量调整离心时间（通常3-5分钟，1500-2000rpm），浓缩沉渣至适量，避免过度离心导致细胞破裂或不足导致漏检。

脱落细胞：需通过刷片、液基细胞学（LBC）等技术收集宫颈、呼吸道等部位的细胞，确保样本量充足且W污染。

二、固定与保存：锁定原始形态

固定是防止细胞自溶、细菌繁殖及结构变形的关键步骤。常用固定液如95%乙醇、甲醇或福尔马林需根据样本类型选择：

细胞学样本：95%乙醇固定可快速穿透细胞膜，保留核质细节；福尔马林固定适用于组织切片，但需注意其可能引起蛋白质交联导致抗原性改变。

微生物样本：需根据菌种特性选择固定方式（如革兰氏染色需自然干燥后固定），避免过度加热导致形态改变。

保存条件：固定后样本需置于4℃冰箱或室温避光保存，避免反复冻融导致结构破坏；活细胞样本需使用专用培养基维持活性。

三、染色策略：增强结构对比度

染色是凸显目标结构的核心手段，需根据检测目标选择染色剂与染色时间：

血液涂片：瑞氏-吉姆萨染色可区分白细胞类型、红细胞形态及血小板数量；需控制染色时间（通常5-10分钟），避免欠染（核结构不清晰）或过染（背景过深）。

微生物检测：革兰氏染色需严格区分阳性菌（紫色）与阴性菌（红色）；抗酸染色用于结核分枝杆菌检测，需注意脱色时间控制避免假阴性。

特殊染色：如PAS染色用于糖原检测、铁染色用于骨髓细胞分析，需根据试剂特性调整步骤与时间，确保特异性染色效果。

四、盖玻片与封片：减少光学畸变

盖玻片需清洁无划痕，避免气泡或杂质干扰成像。封片时需控制树胶用量，避免溢出污染物镜；需缓慢加盖防止气泡产生；对于需动态观察的样本（如活细胞），可采用水溶性封片剂维持样品活性。封片后需检查样品是否平整，避免因盖玻片倾斜导致图像畸变。

五、操作规范与质量控制：避免人为误差

检验科制样需严格遵循标准化操作流程（SOP），并定期进行质量控制：

人员培训：操作人员需经过专业培训，熟练掌握推片、染色、封片等技能，避免因操作不当导致结构失真或数据误差。

设备维护：显微镜需定期校准（如物镜倍率、照明均匀性），确保成像质量稳定；染色设备需清洁无残留，避免交叉污染。

质控样本：需定期使用标准质控样本（如已知细胞形态的血涂片、标准菌株）进行验证，确保染色效果、成像质量及诊断准确性符合要求。

六、环境与安全：保障人员与样本安全

检验科制样环境需满足生物安全要求，避免交叉污染与职业暴露：

生物安全：操作需在生物安全柜中进行，避免气溶胶扩散；废弃样本需按规定进行灭菌处理（如高压蒸汽灭菌）。

个人防护：操作人员需佩戴手套、口罩、护目镜等防护装备，避免直接接触样本或有害试剂。

环境控制：实验室需保持清洁、干燥，温度控制在22±2℃，湿度40-60%，避免灰尘、气流或温度波动干扰制样过程。

检验科医用显微镜制样是一门“细节决定诊断”的技术。从样本采集到封片保存，每一步都需严谨操作以避免“视觉误差”。